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 高效液相色谱HPLC故障问题排查（九）

高效液相色谱HPLC故障问题排查之九

问题：峰高变化（一个或多个峰）

可能的原因：

1、一个或多个样品组分变质或色谱柱活性发生变化。

2、漏液，特别是在进样口与色谱柱入口之间。（保留时间也会改变。）

3、样品量不一致。

4、检测器或记录器设置被更改。

5、检测器灯能量不足。

6、检测器流通池污染。

排查方法：

1、采用新鲜样品或标样，以确认样品是否为问题的根源。如果某些或所有峰值仍小于预期值，则更换色谱柱。如果新的色谱柱改善了分析，则尝试运用适当的程序，再生旧的色谱柱。如果性能未得到提高，则丢弃旧的色谱柱。

2、检查系统是否有松动的配件。检查泵是否有漏液、是否有盐析出和异常噪音。必要时更换泵密封件。

3、确保样品一致。对于固定体积定量环，使用2-3倍环体积以确保环被完全充满。确保自动进样器样品瓶中有充足的样品且没有气泡。检查进样针是否有空气。在具有洗涤或冲刷步骤的系统中，确保洗涤溶液不会沉淀样品组分。

4、检查设置。

5、更换灯。

6、清洗流通池。

多峰

问题：选择性发生变化

可能的原因：

1、增加或减少溶剂离子强度、pH或添加剂浓度（特别影响离子溶质）。

2、色谱柱被更换，新色谱柱的选择性与旧色谱柱不同。

3、样品被注入错误的溶剂，或者过量注入强溶剂（100-200 μL）。

4、柱温发生变化。

排查方法：

1、检查流动相的组成。

2、确认色谱柱填料类型。对于可再现分析，使用相同的色谱柱类型。确定变化是否逐渐发生。如果是，则键合相可能已被剥离。色谱柱活性可能发生改变，或色谱柱可能已被污染。

3、调节溶剂。尽可能在流动相中注入样品。

4、调节温度。如果必要，使用柱温箱保持恒温。


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