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间充质干细胞的扩增

间充质干细胞的扩增

  1. 一旦细胞达到约80％的汇合并且正在积极增殖时，传代培养细胞。
    重要提示：在达到100％汇合之前进行传代细胞培养。

  2. 小心地从含有人间充质干细胞汇合层的10 cm组织培养板中取出培养基。涂抹3-5 mL胰蛋白酶-EDTA溶液 (SM-2003-C)，并在37℃培养箱中孵育3-5分钟。

  3. 用手掌轻轻拍板的侧面，检查板上的细胞完全脱离。

  4. 向板中加入5 mL间充质干细胞扩增培养基 (SCM015 ｏｒ SCM045)。

  5. 轻轻旋转培养板以混合细胞悬液。将解离后的细胞转移到15 mL锥形管中。

  6. 将试管以300 × g离心3-5分钟以沉淀细胞。

  7. 丢弃上清液。

  8. 将含有8 ng/mL FGF-2的2 mL间充质干细胞扩增培养基（预热至37°C）加于锥形管，并彻底重悬细胞。
    重要提示：请勿涡旋细胞。

  9. 使用血细胞计数器计数细胞。

  10. 将细胞以5,000-6,000个细胞/cm2的密度接种到含有8 ng/mL FGF-2的间充质干细胞扩增培养基的适当培养瓶、板或孔中。

  11. 细胞可以2 × 106个细胞/小管的密度混入MSC生长培养基及10％ DMSO（D2650）中冷冻。


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