细胞培养基、添加剂和试剂
确(que)保充(chong)分(fen)的(de)细(xi)(xi)胞生长对于从细(xi)(xi)胞培养研究中收(shou)集准确(que)的(de)数(shu)(shu)据至关重要。可使用血球计(ji)数(shu)(shu)仪或能够更加精确(que)进行细(xi)(xi)胞计(ji)数(shu)(shu)的(de)自动(dong)化细(xi)(xi)胞计(ji)数(shu)(shu)仪进行细(xi)(xi)胞计(ji)数(shu)(shu)。
培养(yang)中(zhong)的(de)细胞生长通常(chang)会(hui)经历四个(ge)阶段(duan):
滞后阶段-细胞在调整适应培养条件,并不会发生分裂。
对数生长阶(jie)段-细胞在活跃地进行分裂,因此这是评估种群生长或收集数据的最佳阶段。对数阶段后期是传代(继代培养)细胞的最佳时机。
平台(tai)(静态)阶段-生长随着细胞接近100%的汇合度而放缓,此时细胞也会随着细胞废物的累积和资源耗尽而最易发生应激或损伤。
下降(jiang)阶段(duan)-活细胞种群随着细胞死亡占据主导而发生下降。
培(pei)(pei)养的(de)(de)(de)(de)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)需要补充用(yong)于(yu)生(sheng)(sheng)长的(de)(de)(de)(de)营养素(su)(su)。除了(le)提(ti)供(gong)平衡的(de)(de)(de)(de)盐、碳水化合物(wu)、氨基(ji)酸(suan)、维生(sheng)(sheng)素(su)(su)、脂(zhi)肪酸(suan)和(he)脂(zhi)质(zhi)、蛋(dan)白质(zhi)和(he)肽、微量元素(su)(su)和(he)生(sheng)(sheng)长因(yin)子(zi)外(wai),哺(bu)乳(ru)动物(wu)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)养基(ji)还(hai)必(bi)(bi)须(xu)保(bao)持生(sheng)(sheng)理性(xing)pH值(zhi)。胎牛血清(FBS)是哺(bu)乳(ru)动物(wu)细(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)养中使用(yong)最广(guang)泛的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)长补剂,因(yin)为其含有多种上述的(de)(de)(de)(de)必(bi)(bi)需细(xi)(xi)胞(bao)(bao)营养素(su)(su),并已被证明可(ke)支持培(pei)(pei)养中细(xi)(xi)胞(bao)(bao)和(he)组织的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)长。对于(yu)需要明确培(pei)(pei)养基(ji)或减(jian)低动物(wu)成(cheng)分(fen)的(de)(de)(de)(de)应用(yong),无异种培(pei)(pei)养基(ji)制剂可(ke)提(ti)供(gong)具有已知组成(cheng)的(de)(de)(de)(de)无动物(wu)成(cheng)分(fen)制剂。
由(you)于(yu)培养(yang)(yang)(yang)基(ji)和补剂(ji)通常也为机会性微生物(wu)的(de)生长提供了丰富的(de)营养(yang)(yang)(yang),因此成(cheng)功的(de)细(xi)胞(bao)培养(yang)(yang)(yang)需(xu)要无(wu)菌(jun)技术和定(ding)期(qi)观察(cha)(cha),以确保不存在会导致细(xi)胞(bao)死亡(wang)或混淆体内样生长的(de)污染(ran)物(wu)。对于(yu)无(wu)法在通过(guo)显微观察(cha)(cha)到的(de)常见微生物(wu)污染(ran)物(wu),可使用支原体检测试剂(ji)进行(xing)定(ding)期(qi)筛查以保护培养(yang)(yang)(yang)物(wu)和组织培养(yang)(yang)(yang)环境。
酵(jiao)(jiao)母培(pei)养(yang)物(wu),如(ru)酿(niang)酒酵(jiao)(jiao)母和(he)巴斯(si)德毕赤酵(jiao)(jiao)母(毕赤酵(jiao)(jiao)母),常用(yong)于重组蛋(dan)(dan)白表(biao)达(da)和(he)基(ji)因功能研究。酵(jiao)(jiao)母培(pei)养(yang)基(ji)制剂中(zhong)通常包含的重要营养(yang)素包括蛋(dan)(dan)白胨、酵(jiao)(jiao)母提(ti)取物(wu)和(he)右旋糖或(huo)葡(pu)萄(tao)糖。
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