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哺(bu)乳(ru)动物细(xi)胞培养是一种面向研究、临床和(he)制药应(ying)用(yong)的(de)重要工具(ju)，可将从动物组织分离得到(dao)的(de)细(xi)胞培养扩(kuo)增，用(yong)于细(xi)胞生(sheng)(sheng)物学(xue)和(he)疾病研究以及抗体(ti)、蛋白质和(he)疫苗生(sheng)(sheng)产。这些永生(sheng)(sheng)化的(de)哺(bu)乳(ru)动物细(xi)胞系可在体(ti)外长(zhang)期生(sheng)(sheng)长(zhang)，常用(yong)作复杂(za)生(sheng)(sheng)物学(xue)的(de)简化模型。

哺(bu)乳动物细胞的体外生长

细(xi)胞(bao)生长需(xu)要复杂(za)的营(ying)养(yang)混合物(wu)(wu)，包括糖类、氨基酸、白蛋(dan)白、维生素、矿物(wu)(wu)质和生长因(yin)子等(deng)。细(xi)胞(bao)培(pei)养(yang)基是哺乳动物(wu)(wu)细(xi)胞(bao)体(ti)外培(pei)养(yang)所需(xu)营(ying)养(yang)物(wu)(wu)质的主要来源。而培(pei)养(yang)箱则为细(xi)胞(bao)培(pei)养(yang)提供无菌环(huan)境，保(bao)持(chi)37 °C的理想温度(du)以及(ji)5%的 CO2浓度，使箱内pH水平接近哺乳动物血液。

除(chu)了(le)某些类(lei)型的(de)(de)血细(xi)胞(bao)悬浮培养外，多数哺(bu)乳动物组织的(de)(de)细(xi)胞(bao)需要贴壁(bi)培养才能正(zheng)常地分裂和(he)生长(zhang)。经处理过(guo)的(de)(de)聚(ju)苯乙(yi)烯或玻璃材质(zhi)培养瓶、培养板和(he)过(guo)滤器可(ke)(ke)为(wei)细(xi)胞(bao)贴壁(bi)培养提供(gong)生长(zhang)表面。而(er)多聚(ju)D赖(lai)氨(an)酸等合(he)成聚(ju)合(he)物及胶原蛋(dan)白(bai)等细(xi)胞(bao)外基质(zhi)，则可(ke)(ke)为(wei)细(xi)胞(bao)粘附提供(gong)骨架(jia)以促进贴壁(bi)。

哺乳动物细胞培(pei)养技巧(qiao)

无菌技(ji)术可保护细胞体外生长免受(shou)污染。为(wei)确(que)保细(xi)(xi)胞健康并(bing)增(zeng)殖，哺乳动(dong)物细(xi)(xi)胞培(pei)养(yang)(yang)(yang)需(xu)要(yao)进(jin)行传代培(pei)养(yang)(yang)(yang)，在细(xi)(xi)胞达(da)到一定(ding)汇合(he)度后稀释并(bing)更换耗尽的培(pei)养(yang)(yang)(yang)基。细(xi)(xi)胞贴壁培(pei)养(yang)(yang)(yang)时，将细(xi)(xi)胞转移到新培(pei)养(yang)(yang)(yang)瓶(ping)或培(pei)养(yang)(yang)(yang)板(ban)重贴壁之前，必须通过胰蛋(dan)白(bai)酶化等(deng)酶解(jie)法(fa)或刮(gua)铲等(deng)机械法(fa)先将细(xi)(xi)胞解(jie)离。然后采用血(xue)细(xi)(xi)胞计数(shu)板(ban)和自动(dong)细(xi)(xi)胞计数(shu)仪进(jin)行细(xi)(xi)胞计数(shu)来(lai)测定(ding)细(xi)(xi)胞活力并(bing)确(que)定(ding)传代接(jie)种密度和适(shi)合(he)下游过程的细(xi)(xi)胞密度。培(pei)养(yang)(yang)(yang)细(xi)(xi)胞可用液氮冻(dong)存生成种子(zi)库，需(xu)要(yao)时解(jie)冻(dong)即可制(zhi)备。

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